当前位置:
  1. 美800保健品网
  2. 美国西洋参
  3. 中药材真伪鉴别新方法(DNA分子标记鉴别技术)

中药材真伪鉴别新方法(DNA分子标记鉴别技术)

中药品种繁多,应用历史悠久,产地广泛。由于地理和历史原因,药材品种混乱,来源复杂。例如,仅《中华人民共和国药典》2000年版收载的534种中药材中,就有143种为多源(2源以上),占总数的27%。此外,中药同形异义的普遍现象,以及假药、混淆品、错药等因素,直接影响到中药化学成分和药理作用的研究、制剂生产、临床疗效和推广使用,严重影响了中药的可信度。同时,即使是同一种药材,由于不同产地、野生和栽培植物以及不同生长年限的药材质量和疗效不同,这些问题对中药材的鉴别方法提出了新的挑战,依靠经典的形态学分类和传统的鉴别方法已经不能满足鉴别的需要。随着各种先进仪器和分子生物学的发展,各种新的鉴定方法也被引入,如红外光谱鉴定、化学指纹鉴定和DNA分子标记鉴定等。中药鉴定领域显示出旺盛的生命力。

近年来,基于聚合酶链反应的DNA分子标记鉴定技术在中药材真伪鉴定中发挥了重要作用。与此同时,它也在鉴别多源品种和道地药材方面崭露头角,显示出巨大的前景。以人参和西洋参的分子标记鉴定为例,可以清晰地看到中药分子标记鉴定的研究轨迹。自1994年首次用聚合酶链反应鉴定人参和西洋参以来,已有24篇相关报道,根据所用方法不同,可分为三类:

①基于聚合酶链反应方法的文章有18篇,其中9篇使用随机引物,如RAPD和Ap-聚合酶链反应,3篇使用特异性引物,如MARMS和SCAR,3篇使用AFLP,3篇使用聚合酶链反应AFLP

②有7篇文章采用了DNA测序技术;

(3)有一种基于分子杂交的方法,主要针对重复序列。

有些报道同时使用两种方法,如ITS序列分析和RAPD、PCR-RFLP和RAPD。根据每篇文献的发表时间和所采用的方法,可以得出人参药材分子鉴定的发展特点:

(1)随机引物占优势,但随着时间的推移,RAPD等方法逐渐被引入该阶段。由于事先不知道基因组信息的特征,RAPD已成为中药材分子鉴定的最重要方法。然而,随着18S和matK基因的测序,新的方法,如MARMS,已经诞生。同时,在RAPD基础上发展起来的方法也显示出良好的应用前景,如利用梯度聚合酶链反应检测中药复方中人参的SCAR标记和聚合酶链反应引物都是从RAPD的特定条带获得的。

(2)序列分析是各种新方法应用的基础。RDNA在植物核基因组中是研究最广泛的基因之一。18S、ITS和5S已成功应用于人参和西洋参的鉴别。测序后的核苷酸变异可直接作为鉴定指标,或者等位基因聚合酶链反应可直接检测突变位点,从而通过电泳实现准确鉴定。等位基因聚合酶链反应方法简单、快速、目标明确,具有很大的推广应用价值。此外,叶绿体基因的编码间隔逐渐成为分子系统学的热点。例如,参考材料已经对叶绿体基因中的matK和trnC-trnD进行了测序。

③简单、快速、准确是分子鉴定的发展趋势。人参药材的分子鉴定过程基本上是随机引物-序列分析-聚合酶链反应-RFLP-AFLP特异性引物聚合酶链反应,反映了从复杂到简单的过程。在过去的两年中,特异性引物的应用和化合物中人参药材的成功检测表明人参药材的鉴定已经达到了一个完美的水平。然而,这些只解决了药材的“真实性”问题,却仍然没有好的“质量”方法。例如,韩国人参与人参栽培,韩国人参与中国人参栽培,以及西方国家参与鉴定在中国引进和栽培的西洋参,都给我们提出了新的问题。

针对上述问题,我们可以加强以下几个方面的研究,以达到“真实性”鉴定的最终目的。

1.寻找进化速度快、种间差异大的DNA序列进行测序分析。例如叶绿体基因间隔区trnD-trnT、rpoB-trnC、trnH-psbA等。获得品种的特征DNA序列是将其转化为简单高效的PCR鉴定和高通量芯片鉴定的基础。同时,获得大量序列也为中药比较基因组学的研究提供了可能和基础。

二是大力开发新的、实用的中药材分子标记鉴定方法和试剂盒。中药中的DNA降解严重,选择合适的DNA提取和鉴定方法是保证中药分子标记鉴定成功的基础。因此,应筛选和改进现有的各种新技术和新方法,以满足中药材鉴定的需要。

三、积极结合其他技术和方法。不同的方法有一定的适用范围和局限性。例如,因为DNA分子标记不受生物体发育阶段的影响,所以不可能鉴别不同生长年份的药材。也很难鉴别具有相同基本来源(基因型)的野生和栽培药材。单一的DNA分子标记鉴定不能解决中药材鉴定的所有困难。因此,积极寻找与各种新方法和新技术的有机结合,可能会为中草药的鉴定提供新的空间。例如,快速发展的代谢组学研究提供了鉴别中药材代谢标志物的可能性。高通量、高灵敏度的气相色谱-飞行时间质谱联用仪和定量气相色谱-飞行时间质谱联用仪等仪器可以同时观察成千上万种化合物,并监测近全景代谢物的变化。该方法不仅能观察到主要活性化合物,还能检测到代谢中间体(包括非活性物质)的变化,不仅能反映植物基因型的差异,还能反映环境因素的影响。“双标记”法将DNA分子标记和代谢标记相结合,有利于建立一个与中药材质量密切相关的特异、高效的标记平台,为中药材的鉴定和质量控制提供新的方法和技术。

标题:中药材真伪鉴别新方法(DNA分子标记鉴别技术)

如若转载,请注明出处:http://www.mei800.com/zhongyi/174933.html